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上海璟瑞科学仪器有限公司

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公司动态
GB 4789.5-2012 标准 食品微生物学检验 志贺氏菌检验
2012-07-13
前食品安全国家标准 食品微生物学检验 志贺氏菌检验
1、范围
本标准规定了食品中志贺 本标准规定了食品中志贺 本标准规定了食品中志贺 本标准规定了食品中志贺 本标准规定了食品中志贺 氏菌(Shigella Shigella ShigellaShigella)的检验方法。 的检验方法。 的检验方法。 的检验方法。GB 4789.5-2012 本标准适用于食品中志贺 本标准适用于食品中志贺 本标准适用于食品中志贺 本标准适用于食品中志贺 本标准适用于食品中志贺 氏菌的检验。 菌的检验。 菌的检验。

2、设备和材料
除微生物 除微生物 实验室常规灭菌及培养设备外,其他和材料如下: 实验室常规灭菌及培养设备外,其他和材料如下: 实验室常规灭菌及培养设备外,其他和材料如下: 实验室常规灭菌及培养设备外,其他和材料如下: 实验室常规灭菌及培养设备外,其他和材料如下: 实验室常规灭菌及培养设备外,其他和材料如下: 实验室常规灭菌及培养设备外,其他和材料如下: 实验室常规灭菌及培养设备外,其他和材料如下: 实验室常规灭菌及培养设备外,其他和材料如下: 实验室常规灭菌及培养设备外,其他和材料如下: 实验室常规灭菌及培养设备外,其他和材料如下: 实验室常规灭菌及培养设备外,其他和材料如下:
a) 恒温培养箱: 恒温培养箱: 恒温培养箱: 恒温培养箱: 36 ℃±1 ℃ 36 ℃±1 ℃ 36 ℃±1 ℃ 36 ℃±1 ℃ ;
b) 冰箱: 冰箱: 2 ℃ ~5 ℃ 5 ℃ ;
c) 膜过滤系统; 膜过滤系统; 膜过滤系统; 膜过滤系统;
d) 厌氧培养装置: 厌氧培养装置: 厌氧培养装置: 厌氧培养装置: 41.5 41.5 ℃1 ℃;
e) 电子 天平:感量 天平:感量 天平:感量 天平:感量 0.1 g 0.1 g0.1 g;
f) 显微镜: 显微镜: 显微镜: 10 ×~100 ×;
g) 均质器 均质器 ;
h) 振荡器 振荡器 ;
i) 无菌吸管: 无菌吸管: 无菌吸管: 1 mL (具 0.01 mL 0.01 mL刻度)、 刻度)、 刻度)、 10 mL 10 mL (具 0.1 mL 0.1 mL 刻度)或微量移液器及吸头 刻度)或微量移液器及吸头 刻度)或微量移液器及吸头 刻度)或微量移液器及吸头 刻度)或微量移液器及吸头 刻度)或微量移液器及吸头 ;
j) 无菌 均质杯 均质杯 或无菌 或无菌 均质袋 均质袋 :容量 500 mL 00 mL ;
k) 无菌培养皿:直径 无菌培养皿:直径 无菌培养皿:直径 无菌培养皿:直径 无菌培养皿:直径 90 mm90 mm90 mm ;
l) pH 计或 pH 比色管或精密 比色管或精密 比色管或精密 pH 试纸 ;
m) 全自动微生物化鉴定系统。 全自动微生物化鉴定系统。 全自动微生物化鉴定系统。 全自动微生物化鉴定系统。 全自动微生物化鉴定系统。 全自动微生物化鉴定系统。 全自动微生物化鉴定系统。
3 培养基和试剂
3.1 志贺氏菌增肉汤 志贺氏菌增肉汤 志贺氏菌增肉汤 志贺氏菌增肉汤 志贺氏菌增肉汤 -新生霉素 :见附录A 中A.1A.1 。
3.2 麦康凯( 麦康凯( 麦康凯( MACMACMAC)琼脂: )琼脂: )琼脂: 见附录A 中A.2。
3.3 木糖赖氨酸脱氧胆盐( 木糖赖氨酸脱氧胆盐( 木糖赖氨酸脱氧胆盐( 木糖赖氨酸脱氧胆盐( 木糖赖氨酸脱氧胆盐( 木糖赖氨酸脱氧胆盐( XLDXLDXLD)琼脂: )琼脂: 见附录A 中A.3。
3.4 志贺氏菌显色培养基。 志贺氏菌显色培养基。 志贺氏菌显色培养基。 志贺氏菌显色培养基。 志贺氏菌显色培养基。 志贺氏菌显色培养基。
3.5 三糖铁( 三糖铁( 三糖铁( TSITSI )琼脂 :见附录A 中A.4。
3.6 营养琼脂斜面: 营养琼脂斜面: 营养琼脂斜面: 营养琼脂斜面: 见附录A 中A.5。
3.7 半固体琼脂 半固体琼脂 半固体琼脂 :见附录A 中A.6A.6 。
3.8 葡萄糖铵培养基: 葡萄糖铵培养基: 葡萄糖铵培养基: 葡萄糖铵培养基: 葡萄糖铵培养基: 见附录A 中A.7A.7 。
3.9 尿素琼脂: 尿素琼脂: 尿素琼脂: 见附录A 中A.8A.8 。
3.10 β-半乳糖苷酶培养基: 乳糖苷酶培养基: 乳糖苷酶培养基: 乳糖苷酶培养基: 乳糖苷酶培养基: 见附录A 中A.9A.9 。
3.11 氨基酸脱羧酶试验培养: 氨基酸脱羧酶试验培养: 氨基酸脱羧酶试验培养: 氨基酸脱羧酶试验培养: 氨基酸脱羧酶试验培养: 氨基酸脱羧酶试验培养: 见附录A 中A.10A.10 。
3.12 糖发酵管: 糖发酵管: 糖发酵管: 见附录A 中A.11A.11 A.11。
3.13 西蒙氏柠檬酸盐培养基 西蒙氏柠檬酸盐培养基 西蒙氏柠檬酸盐培养基 西蒙氏柠檬酸盐培养基 西蒙氏柠檬酸盐培养基 西蒙氏柠檬酸盐培养基 :见附录A 中A.12A.12 A.12。
3.14 粘液酸盐培养基: 粘液酸盐培养基: 粘液酸盐培养基: 粘液酸盐培养基: 见附录A 中A. 13A. 13 。
3.15 蛋白胨水、靛基质试剂: 蛋白胨水、靛基质试剂: 蛋白胨水、靛基质试剂: 蛋白胨水、靛基质试剂: 蛋白胨水、靛基质试剂: 蛋白胨水、靛基质试剂: 见附录A 中A.14A.14 A.14。
3.16 志贺氏菌属诊断血清。 志贺氏菌属诊断血清。 志贺氏菌属诊断血清。 志贺氏菌属诊断血清。 志贺氏菌属诊断血清。 志贺氏菌属诊断血清。
3.17 生化鉴定试剂盒。 生化鉴定试剂盒。 生化鉴定试剂盒。 生化鉴定试剂盒。
4 检验程序 检验程序
志贺氏菌检验程序见图 志贺氏菌检验程序见图 志贺氏菌检验程序见图 志贺氏菌检验程序见图 志贺氏菌检验程序见图 1。

图 1 志贺氏菌检验程序 志贺氏菌检验程序 志贺氏菌检验程序 志贺氏菌检验程序
5 操作步骤
5.1 增菌
以无菌操作 以无菌操作 取检 样 25 g(mL ),加入装有灭菌 加入装有灭菌 225 mL 志贺氏菌增肉汤 志贺氏菌增肉汤 志贺氏菌增肉汤 的均质杯, 均质杯, 用旋转刀片式均 用旋转刀片式均 用旋转刀片式均 用旋转刀片式均 质器以 质器以 8 000 r/min 8 000 r/min 8 000 r/min8 000 r/min8 000 r/min8 000 r/min~10 000 r/min 10 000 r/min 10 000 r/min10 000 r/min10 000 r/min10 000 r/min均质;或 均质;或 加入装有 加入装有 加入装有 225225 mL 志贺氏菌增肉汤 志贺氏菌增肉汤 志贺氏菌增肉汤 的均质袋中,用 均质袋中,用 均质袋中,用 均质袋中,用 拍击式均质 拍击式均质 拍击式均质 拍击式均质 器连续均质 连续均质 连续均质 1 min 1 min1 min~2 min 2 min2 min,液体样品振荡混匀即可。 ,液体样品振荡混匀即可。 ,液体样品振荡混匀即可。 ,液体样品振荡混匀即可。 ,液体样品振荡混匀即可。 ,液体样品振荡混匀即可。 于 41.5 41.5 ℃±1℃,厌 氧培养 氧培养 16 h16 h ~20 h 。
5.2 分离
取增菌后的志贺氏液分别划线接种于 取增菌后的志贺氏液分别划线接种于 取增菌后的志贺氏液分别划线接种于 取增菌后的志贺氏液分别划线接种于 取增菌后的志贺氏液分别划线接种于 取增菌后的志贺氏液分别划线接种于 取增菌后的志贺氏液分别划线接种于 取增菌后的志贺氏液分别划线接种于 XLDXLDXLD琼脂平板和 琼脂平板和 MACMACMAC琼脂平板或 琼脂平板或 琼脂平板或 志贺氏菌显色培养基平板上,于 36 ℃1 ℃培养20 h~24 h,观察各个平板上生长的菌落形态。宋内氏志贺氏菌的单个菌落直径大于其他志贺氏菌。若出现的菌落不典型或菌落较小不易观察,则继续培养至48 h再进行观察。志贺氏菌在不同选择性琼脂平板上的菌落特征见表1。
36 ℃±1 ℃,20 h20 h20 h20 h~48 h48 h48 h48 h
XLDXLDXLD
挑取可疑菌落 挑取可疑菌落 挑取可疑菌落
TSI TSI,半固体 半固体 ,
营养琼脂斜面 营养琼脂斜面 营养琼脂斜面
MAC MAC或志贺氏菌显色培养基 或志贺氏菌显色培养基 或志贺氏菌显色培养基 或志贺氏菌显色培养基 或志贺氏菌显色培养基 或志贺氏菌显色培养基
生化鉴定 生化鉴定
报告
血清学分型 血清学分型
志贺氏菌属分群及型结果 志贺氏菌属分群及型结果 志贺氏菌属分群及型结果 志贺氏菌属分群及型结果 志贺氏菌属分群及型结果 志贺氏菌属分群及型结果
检样
25 g (或 25 mL 25 mL 25 mL)样品 +志贺氏菌增肉汤 志贺氏菌增肉汤 志贺氏菌增肉汤 志贺氏菌增肉汤 志贺氏菌增肉汤 225 mL 225 mL
41.5 41.5 41.5 41.5 41.5 ℃± ℃±1℃,
16 h16 h16 h16 h~20 h20 h20 h20 h厌氧培养
GB 4789.5-2012
5
表 1 1 志贺氏菌在不同选择性琼脂平板上的落特征 志贺氏菌在不同选择性琼脂平板上的落特征 志贺氏菌在不同选择性琼脂平板上的落特征 志贺氏菌在不同选择性琼脂平板上的落特征 志贺氏菌在不同选择性琼脂平板上的落特征 志贺氏菌在不同选择性琼脂平板上的落特征 志贺氏菌在不同选择性琼脂平板上的落特征 志贺氏菌在不同选择性琼脂平板上的落特征 志贺氏菌在不同选择性琼脂平板上的落特征 志贺氏菌在不同选择性琼脂平板上的落特征 志贺氏菌在不同选择性琼脂平板上的落特征
选择性琼脂平板
志贺氏菌的落特征
MACMACMAC琼脂
无色至浅粉红,半透明、光滑湿润圆形边缘整齐
或不XLDXLDXLD琼脂
粉红色至无,半透明、光滑湿润圆形边缘整齐
或不志贺氏菌显色培养基
按照显色培养基的说明进行判定
5.3 初步 生化试验 生化试验 生化试验
5.3.1 自选择性琼脂平板上分别挑 自选择性琼脂平板上分别挑 自选择性琼脂平板上分别挑 自选择性琼脂平板上分别挑 自选择性琼脂平板上分别挑 自选择性琼脂平板上分别挑 取2个以上典型或可疑菌落,分别接种 个以上典型或可疑菌落,分别接种 个以上典型或可疑菌落,分别接种 个以上典型或可疑菌落,分别接种 个以上典型或可疑菌落,分别接种 个以上典型或可疑菌落,分别接种 个以上典型或可疑菌落,分别接种 个以上典型或可疑菌落,分别接种 TSI TSI、半固体和营养琼脂斜面各一 和营养琼脂斜面各一 和营养琼脂斜面各一 和营养琼脂斜面各一 和营养琼脂斜面各一 管,置 36 ℃1 ℃培养20 h~24 h,分别观察结果。
5.3.2 凡是三糖铁琼脂中斜面产碱、底层产酸(发酵葡萄糖,不发酵乳糖,蔗糖)、不产气(福氏志贺氏菌6型可产生少量气体)、不产硫化氢、半固体管中无动力的菌株,挑取其5.3.1 5.3.1 5.3.1中已培养的营养 琼脂斜面上生长的菌苔,进行生化试验和血清学分型。
5.4 生化试验及附加生化试验
5.4.1生化试验
用 5.3.1 5.3.1中已培养的 已培养的 营养 琼脂斜面上生长的菌苔, 琼脂斜面上生长的菌苔, 琼脂斜面上生长的菌苔, 琼脂斜面上生长的菌苔, 琼脂斜面上生长的菌苔, 琼脂斜面上生长的菌苔, 进行生化试验 进行生化试验 进行生化试验 ,即 β-半乳糖苷酶 半乳糖苷酶 、尿素 、赖氨酸脱 赖氨酸脱 赖氨酸脱 羧酶 、鸟氨酸脱羧酶以及水杨苷和七叶的分解试验。除宋内氏志贺菌 、鲍鸟氨酸脱羧酶以及水杨苷和七叶的分解试验。除宋内氏志贺菌 、鲍鸟氨酸脱羧酶以及水杨苷和七叶的分解试验。除宋内氏志贺菌 、鲍鸟氨酸脱羧酶以及水杨苷和七叶的分解试验。除宋内氏志贺菌 、鲍鸟氨酸脱羧酶以及水杨苷和七叶的分解试验。除宋内氏志贺菌 、鲍鸟氨酸脱羧酶以及水杨苷和七叶的分解试验。除宋内氏志贺菌 、鲍鸟氨酸脱羧酶以及水杨苷和七叶的分解试验。除宋内氏志贺菌 、鲍鸟氨酸脱羧酶以及水杨苷和七叶的分解试验。除宋内氏志贺菌 、鲍鸟氨酸脱羧酶以及水杨苷和七叶的分解试验。除宋内氏志贺菌 、鲍鸟氨酸脱羧酶以及水杨苷和七叶的分解试验。除宋内氏志贺菌 、鲍鸟氨酸脱羧酶以及水杨苷和七叶的分解试验。除宋内氏志贺菌 、鲍鸟氨酸脱羧酶以及水杨苷和七叶的分解试验。除宋内氏志贺菌 、鲍鸟氨酸脱羧酶以及水杨苷和七叶的分解试验。除宋内氏志贺菌 、鲍鸟氨酸脱羧酶以及水杨苷和七叶的分解试验。除宋内氏志贺菌 、鲍鸟氨酸脱羧酶以及水杨苷和七叶的分解试验。除宋内氏志贺菌 、鲍鸟氨酸脱羧酶以及水杨苷和七叶的分解试验。除宋内氏志贺菌 、鲍鸟氨酸脱羧酶以及水杨苷和七叶的分解试验。除宋内氏志贺菌 、鲍13 型的鸟 型的鸟 氨酸 阳性 ;宋内氏菌 宋内氏菌 宋内氏菌 和痢疾志贺氏菌 和痢疾志贺氏菌 和痢疾志贺氏菌 和痢疾志贺氏菌 1型,鲍氏志贺菌 型,鲍氏志贺菌 型,鲍氏志贺菌 型,鲍氏志贺菌 型,鲍氏志贺菌 13 型的 β-半乳糖苷酶为阳性以外 半乳糖苷酶为阳性以外 半乳糖苷酶为阳性以外 半乳糖苷酶为阳性以外 半乳糖苷酶为阳性以外 ,其余生化试验志贺 ,其余生化试验志贺 ,其余生化试验志贺 ,其余生化试验志贺 ,其余生化试验志贺 氏菌属的培养物均为阴性结果。另外 氏菌属的培养物均为阴性结果。另外 氏菌属的培养物均为阴性结果。另外 氏菌属的培养物均为阴性结果。另外 氏菌属的培养物均为阴性结果。另外 氏菌属的培养物均为阴性结果。另外 氏菌属的培养物均为阴性结果。另外 氏菌属的培养物均为阴性结果。另外 氏菌属的培养物均为阴性结果。另外 由于福氏志贺菌 由于福氏志贺菌 由于福氏志贺菌 由于福氏志贺菌 由于福氏志贺菌 6型的 生化特性和痢疾志贺氏菌或鲍相 生化特性和痢疾志贺氏菌或鲍相 生化特性和痢疾志贺氏菌或鲍相 生化特性和痢疾志贺氏菌或鲍相 生化特性和痢疾志贺氏菌或鲍相 生化特性和痢疾志贺氏菌或鲍相 生化特性和痢疾志贺氏菌或鲍相 生化特性和痢疾志贺氏菌或鲍相 生化特性和痢疾志贺氏菌或鲍相 似, 必要时还需加做靛基质、甘露醇棉子糖油试验似, 必要时还需加做靛基质、甘露醇棉子糖油试验似, 必要时还需加做靛基质、甘露醇棉子糖油试验似, 必要时还需加做靛基质、甘露醇棉子糖油试验似, 必要时还需加做靛基质、甘露醇棉子糖油试验似, 必要时还需加做靛基质、甘露醇棉子糖油试验似, 必要时还需加做靛基质、甘露醇棉子糖油试验似, 必要时还需加做靛基质、甘露醇棉子糖油试验似, 必要时还需加做靛基质、甘露醇棉子糖油试验似, 必要时还需加做靛基质、甘露醇棉子糖油试验似, 必要时还需加做靛基质、甘露醇棉子糖油试验似, 必要时还需加做靛基质、甘露醇棉子糖油试验似, 必要时还需加做靛基质、甘露醇棉子糖油试验似, 必要时还需加做靛基质、甘露醇棉子糖油试验也可做革兰氏染色检查和氧 化酶试验,应为也可做革兰氏染色检查和氧 化酶试验,应为也可做革兰氏染色检查和氧 化酶试验,应为也可做革兰氏染色检查和氧 化酶试验,应为也可做革兰氏染色检查和氧 化酶试验,应为也可做革兰氏染色检查和氧 化酶试验,应为也可做革兰氏染色检查和氧 化酶试验,应为也可做革兰氏染色检查和氧 化酶试验,应为也可做革兰氏染色检查和氧 化酶试验,应为也可做革兰氏染色检查和氧 化酶试验,应为化酶阴性的革兰氏杆菌。生化反应不符合株 酶阴性的革兰氏杆菌。生化反应不符合株 酶阴性的革兰氏杆菌。生化反应不符合株 酶阴性的革兰氏杆菌。生化反应不符合株 酶阴性的革兰氏杆菌。生化反应不符合株 酶阴性的革兰氏杆菌。生化反应不符合株 酶阴性的革兰氏杆菌。生化反应不符合株 酶阴性的革兰氏杆菌。生化反应不符合株 酶阴性的革兰氏杆菌。生化反应不符合株 酶阴性的革兰氏杆菌。生化反应不符合株 酶阴性的革兰氏杆菌。生化反应不符合株 ,即使能与某种志贺氏菌分型血清发生凝集,仍不得 即使能与某种志贺氏菌分型血清发生凝集,仍不得 即使能与某种志贺氏菌分型血清发生凝集,仍不得 即使能与某种志贺氏菌分型血清发生凝集,仍不得 即使能与某种志贺氏菌分型血清发生凝集,仍不得 即使能与某种志贺氏菌分型血清发生凝集,仍不得 即使能与某种志贺氏菌分型血清发生凝集,仍不得 即使能与某种志贺氏菌分型血清发生凝集,仍不得 即使能与某种志贺氏菌分型血清发生凝集,仍不得 即使能与某种志贺氏菌分型血清发生凝集,仍不得 即使能与某种志贺氏菌分型血清发生凝集,仍不得 即使能与某种志贺氏菌分型血清发生凝集,仍不得 判定为志贺氏菌属 判定为志贺氏菌属 判定为志贺氏菌属 判定为志贺氏菌属 。志贺氏菌属生化特性见表 。志贺氏菌属生化特性见表 。志贺氏菌属生化特性见表 。志贺氏菌属生化特性见表 。志贺氏菌属生化特性见表 。志贺氏菌属生化特性见表 。志贺氏菌属生化特性见表 2。
表 2 志贺 氏菌属四个群的生化特征 菌属四个群的生化特征 菌属四个群的生化特征 菌属四个群的生化特征 菌属四个群的生化特征 菌属四个群的生化特征
生化反应
A群:痢疾志贺氏菌
B群:福氏志贺菌
C群: 鲍氏志贺菌
D群:宋内氏志贺菌
ß-半乳糖苷酶
a痢疾志贺 1型和鲍氏 型和鲍氏 13 型为阳性 型为阳性 。
b鲍氏 13 型为鸟氨酸阳 性。
c福氏 4型和 6型常见甘露醇阴性变种 型常见甘露醇阴性变种 。
5.4.2附加生化实验
由于某些不活泼的大肠埃希氏菌( 由于某些不活泼的大肠埃希氏菌( 由于某些不活泼的大肠埃希氏菌( 由于某些不活泼的大肠埃希氏菌( 由于某些不活泼的大肠埃希氏菌( 由于某些不活泼的大肠埃希氏菌( 由于某些不活泼的大肠埃希氏菌( anaerogenic E.col anaerogenic E.col anaerogenic E.col anaerogenic E.col anaerogenic E.col anaerogenic E.col i)、 A-D(AlkalescensAlkalescensAlkalescens Alkalescens Alkalescens -D isparbiotypesD isparbiotypes D isparbiotypes D isparbiotypes D isparbiotypes D isparbiotypes D isparbiotypesD isparbiotypes 碱性 -异型) 菌的部分生化特征与志贺 氏相似,并能某种型血清发凝集;因此前面实验符合菌的部分生化特征与志贺 氏相似,并能某种型血清发凝集;因此前面实验符合菌的部分生化特征与志贺 氏相似,并能某种型血清发凝集;因此前面实验符合菌的部分生化特征与志贺 氏相似,并能某种型血清发凝集;因此前面实验符合菌的部分生化特征与志贺 氏相似,并能某种型血清发凝集;因此前面实验符合菌的部分生化特征与志贺 氏相似,并能某种型血清发凝集;因此前面实验符合菌的部分生化特征与志贺 氏相似,并能某种型血清发凝集;因此前面实验符合菌的部分生化特征与志贺 氏相似,并能某种型血清发凝集;因此前面实验符合菌的部分生化特征与志贺 氏相似,并能某种型血清发凝集;因此前面实验符合菌的部分生化特征与志贺 氏相似,并能某种型血清发凝集;因此前面实验符合菌的部分生化特征与志贺 氏相似,并能某种型血清发凝集;因此前面实验符合菌的部分生化特征与志贺 氏相似,并能某种型血清发凝集;因此前面实验符合菌的部分生化特征与志贺 氏相似,并能某种型血清发凝集;因此前面实验符合菌的部分生化特征与志贺 氏相似,并能某种型血清发凝集;因此前面实验符合菌的部分生化特征与志贺 氏相似,并能某种型血清发凝集;因此前面实验符合菌的部分生化特征与志贺 氏相似,并能某种型血清发凝集;因此前面实验符合菌的部分生化特征与志贺 氏相似,并能某种型血清发凝集;因此前面实验符合菌的部分生化特征与志贺 氏相似,并能某种型血清发凝集;因此前面实验符合菌的部分生化特征与志贺 氏相似,并能某种型血清发凝集;因此前面实验符合菌的部分生化特征与志贺 氏相似,并能某种型血清发凝集;因此前面实验符合菌的部分生化特征与志贺 氏相似,并能某种型血清发凝集;因此前面实验符合菌的部分生化特征与志贺 氏相似,并能某种型血清发凝集;因此前面实验符合氏菌属生化特性的培养物还需 氏菌属生化特性的培养物还需 氏菌属生化特性的培养物还需 氏菌属生化特性的培养物还需 氏菌属生化特性的培养物还需 氏菌属生化特性的培养物还需 另加葡萄糖胺 另加葡萄糖胺 另加葡萄糖胺 另加葡萄糖胺 、西蒙氏柠檬酸盐粘液试验 、西蒙氏柠檬酸盐粘液试验 、西蒙氏柠檬酸盐粘液试验 、西蒙氏柠檬酸盐粘液试验 、西蒙氏柠檬酸盐粘液试验 、西蒙氏柠檬酸盐粘液试验 、西蒙氏柠檬酸盐粘液试验 、西蒙氏柠檬酸盐粘液试验 (36 ℃培养 24 h 24 h ~48 h )。志 贺氏菌属和不活泼大肠埃希、 贺氏菌属和不活泼大肠埃希、 贺氏菌属和不活泼大肠埃希、 贺氏菌属和不活泼大肠埃希、 贺氏菌属和不活泼大肠埃希、 贺氏菌属和不活泼大肠埃希、 贺氏菌属和不活泼大肠埃希、 A-D菌的生化特性区别 菌的生化特性区别 菌的生化特性区别 菌的生化特性区别 见表 3。
GB 4789.5-2012
6
表 3 志贺 氏菌属和不活泼 菌属和不活泼 菌属和不活泼 菌属和不活泼 大肠埃希氏菌 大肠埃希氏菌 大肠埃希氏菌 、A-D菌的生化特性区别 菌的生化特性区别 菌的生化特性区别 菌的生化特性区别
生化反应
A群:痢疾
志贺氏菌
B群:福氏
志贺氏菌
C群:鲍氏
志贺氏菌
D群:宋内氏
志贺氏菌
大肠埃希氏菌
A-D菌
5.4.3 如选择 如选择 生化鉴定试剂盒或全自动微物 生化鉴定试剂盒或全自动微物 生化鉴定试剂盒或全自动微物 生化鉴定试剂盒或全自动微物 生化鉴定试剂盒或全自动微物 生化鉴定试剂盒或全自动微物 生化鉴定试剂盒或全自动微物 生化鉴定系统 生化鉴定系统 生化鉴定系统 ,可根据 ,可根据 ,可根据 5.3.2 5.3.2的初步判断结果,用 的初步判断结果,用 的初步判断结果,用 的初步判断结果,用 的初步判断结果,用 5.3.1 5.3.1中已培 中已培 养的营琼脂斜面 养的营琼脂斜面 养的营琼脂斜面 养的营琼脂斜面 上生长的菌苔 上生长的菌苔 上生长的菌苔 ,使用 ,使用 生化鉴定试剂盒或全自动微物系统 生化鉴定试剂盒或全自动微物系统 生化鉴定试剂盒或全自动微物系统 生化鉴定试剂盒或全自动微物系统 生化鉴定试剂盒或全自动微物系统 生化鉴定试剂盒或全自动微物系统 生化鉴定试剂盒或全自动微物系统 生化鉴定试剂盒或全自动微物系统 生化鉴定试剂盒或全自动微物系统 生化鉴定试剂盒或全自动微物系统 进行鉴定。 进行鉴定。 进行鉴定。
5.5 血清学鉴定 血清学鉴定 血清学鉴定
5.5.1 抗原的准备 抗原的准备 抗原的准备
志贺氏菌属没有 动力,所以志贺氏菌属没有 动力,所以志贺氏菌属没有 动力,所以志贺氏菌属没有 动力,所以志贺氏菌属没有 动力,所以志贺氏菌属没有 动力,所以志贺氏菌属没有 动力,所以鞭毛抗原 鞭毛抗原 。志贺氏菌属主要有体( 。志贺氏菌属主要有体( 。志贺氏菌属主要有体( 。志贺氏菌属主要有体( 。志贺氏菌属主要有体( 。志贺氏菌属主要有体( 。志贺氏菌属主要有体( O)抗原。菌体 )抗原。菌体 )抗原。菌体 )抗原。菌体 )抗原。菌体 O抗原又可分为 抗原又可分为 抗原又可分为 抗原又可分为 型和群的特异性抗原。 型和群的特异性抗原。 型和群的特异性抗原。 型和群的特异性抗原。 型和群的特异性抗原。
一般采用 一般采用 1.2 1.2%~1.5% 琼脂 培养物作为玻片凝集试验用的抗原。 培养物作为玻片凝集试验用的抗原。 培养物作为玻片凝集试验用的抗原。 培养物作为玻片凝集试验用的抗原。 培养物作为玻片凝集试验用的抗原。 培养物作为玻片凝集试验用的抗原。 培养物作为玻片凝集试验用的抗原。
注 1:一些志贺氏菌如果因 为 K抗原的存在而不出现凝集反应时,可挑取菌苔于 1 mL 生理盐水做成浓菌液, 生理盐水做成浓菌液, 100 ℃煮 沸 15 min15 min15 min15 min15 min ~60 min60 min60 min60 min60 min 去除 K抗原后再检查。 原后再检查。
注 2:D群志贺氏菌既可能是光滑型株也粗糙,与其他抗原不 存在交叉反应。肠杆科群志贺氏菌既可能是光滑型株也粗糙,与其他抗原不 存在交叉反应。肠杆科群志贺氏菌既可能是光滑型株也粗糙,与其他抗原不 存在交叉反应。肠杆科群志贺氏菌既可能是光滑型株也粗糙,与其他抗原不 存在交叉反应。肠杆科同,宋内氏志贺菌粗糙型株不一定会自凝。没有 K抗原。
5.5.2 凝集反应 凝集反应
在玻片上划出 在玻片上划出 在玻片上划出 2个约 1cm×2cm 1cm×2cm1cm×2cm 的区域,挑取一环待测菌各放 的区域,挑取一环待测菌各放 的区域,挑取一环待测菌各放 的区域,挑取一环待测菌各放 的区域,挑取一环待测菌各放 的区域,挑取一环待测菌各放 的区域,挑取一环待测菌各放 的区域,挑取一环待测菌各放 的区域,挑取一环待测菌各放 1/2 1/2环于玻片上的每一区域部,在其 环于玻片上的每一区域部,在其 环于玻片上的每一区域部,在其 环于玻片上的每一区域部,在其 环于玻片上的每一区域部,在其 环于玻片上的每一区域部,在其 环于玻片上的每一区域部,在其 环于玻片上的每一区域部,在其 中一个区域下部加 中一个区域下部加 中一个区域下部加 中一个区域下部加 1滴抗血清,在另一区域下部加入 滴抗血清,在另一区域下部加入 滴抗血清,在另一区域下部加入 滴抗血清,在另一区域下部加入 滴抗血清,在另一区域下部加入 滴抗血清,在另一区域下部加入 滴抗血清,在另一区域下部加入 滴抗血清,在另一区域下部加入 1滴生理盐水,作为对照。再用无菌的接种环或针分 滴生理盐水,作为对照。再用无菌的接种环或针分 滴生理盐水,作为对照。再用无菌的接种环或针分 滴生理盐水,作为对照。再用无菌的接种环或针分 滴生理盐水,作为对照。再用无菌的接种环或针分 滴生理盐水,作为对照。再用无菌的接种环或针分 滴生理盐水,作为对照。再用无菌的接种环或针分 滴生理盐水,作为对照。再用无菌的接种环或针分 滴生理盐水,作为对照。再用无菌的接种环或针分 滴生理盐水,作为对照。再用无菌的接种环或针分 滴生理盐水,作为对照。再用无菌的接种环或针分 滴生理盐水,作为对照。再用无菌的接种环或针分 滴生理盐水,作为对照。再用无菌的接种环或针分 别将两个区域内的菌落研成乳状液。玻片倾斜摇动混合 别将两个区域内的菌落研成乳状液。玻片倾斜摇动混合 别将两个区域内的菌落研成乳状液。玻片倾斜摇动混合 别将两个区域内的菌落研成乳状液。玻片倾斜摇动混合 别将两个区域内的菌落研成乳状液。玻片倾斜摇动混合 别将两个区域内的菌落研成乳状液。玻片倾斜摇动混合 别将两个区域内的菌落研成乳状液。玻片倾斜摇动混合 别将两个区域内的菌落研成乳状液。玻片倾斜摇动混合 别将两个区域内的菌落研成乳状液。玻片倾斜摇动混合 别将两个区域内的菌落研成乳状液。玻片倾斜摇动混合 别将两个区域内的菌落研成乳状液。玻片倾斜摇动混合 别将两个区域内的菌落研成乳状液。玻片倾斜摇动混合 1 min 1 min1 min,并对着黑色背景进行观察, , 并对着黑色背景进行观察, 并对着黑色背景进行观察, 并对着黑色背景进行观察, 并对着黑色背景进行观察, 并对着黑色背景进行观察如果抗血清 如果抗血清 如果抗血清 中出现凝结成块的颗粒 中出现凝结成块的颗粒 中出现凝结成块的颗粒 中出现凝结成块的颗粒 中出现凝结成块的颗粒 ,而且生理盐水中没有发自凝现 象那么集反应为阳性。如果出,而且生理盐水中没有发自凝现 象那么集反应为阳性。如果出,而且生理盐水中没有发自凝现 象那么集反应为阳性。如果出,而且生理盐水中没有发自凝现 象那么集反应为阳性。如果出,而且生理盐水中没有发自凝现 象那么集反应为阳性。如果出,而且生理盐水中没有发自凝现 象那么集反应为阳性。如果出,而且生理盐水中没有发自凝现 象那么集反应为阳性。如果出,而且生理盐水中没有发自凝现 象那么集反应为阳性。如果出,而且生理盐水中没有发自凝现 象那么集反应为阳性。如果出,而且生理盐水中没有发自凝现 象那么集反应为阳性。如果出,而且生理盐水中没有发自凝现 象那么集反应为阳性。如果出,而且生理盐水中没有发自凝现 象那么集反应为阳性。如果出,而且生理盐水中没有发自凝现 象那么集反应为阳性。如果出,而且生理盐水中没有发自凝现 象那么集反应为阳性。如果出,而且生理盐水中没有发自凝现 象那么集反应为阳性。如果出,而且生理盐水中没有发自凝现 象那么集反应为阳性。如果出,而且生理盐水中没有发自凝现 象那么集反应为阳性。如果出,而且生理盐水中没有发自凝现 象那么集反应为阳性。如果出,而且生理盐水中没有发自凝现 象那么集反应为阳性。如果出凝集,视作为自。 这时应挑取同一培养基上的其他菌落继续进行试验凝集,视作为自。 这时应挑取同一培养基上的其他菌落继续进行试验凝集,视作为自。 这时应挑取同一培养基上的其他菌落继续进行试验凝集,视作为自。 这时应挑取同一培养基上的其他菌落继续进行试验凝集,视作为自。 这时应挑取同一培养基上的其他菌落继续进行试验凝集,视作为自。 这时应挑取同一培养基上的其他菌落继续进行试验凝集,视作为自。 这时应挑取同一培养基上的其他菌落继续进行试验凝集,视作为自。 这时应挑取同一培养基上的其他菌落继续进行试验凝集,视作为自。 这时应挑取同一培养基上的其他菌落继续进行试验凝集,视作为自。 这时应挑取同一培养基上的其他菌落继续进行试验凝集,视作为自。 这时应挑取同一培养基上的其他菌落继续进行试验凝集,视作为自。 这时应挑取同一培养基上的其他菌落继续进行试验凝集,视作为自。 这时应挑取同一培养基上的其他菌落继续进行试验凝集,视作为自。 这时应挑取同一培养基上的其他菌落继续进行试验凝集,视作为自。
这时应挑取同一培养基上的其他菌落继续进行试验如果 待测菌的 待测菌的 待测菌的 生化特征符合志贺氏菌属,而其血清学试验为阴性的话则按 生化特征符合志贺氏菌属,而其血清学试验为阴性的话则按 生化特征符合志贺氏菌属,而其血清学试验为阴性的话则按 生化特征符合志贺氏菌属,而其血清学试验为阴性的话则按 生化特征符合志贺氏菌属,而其血清学试验为阴性的话则按 生化特征符合志贺氏菌属,而其血清学试验为阴性的话则按 生化特征符合志贺氏菌属,而其血清学试验为阴性的话则按 生化特征符合志贺氏菌属,而其血清学试验为阴性的话则按 生化特征符合志贺氏菌属,而其血清学试验为阴性的话则按 生化特征符合志贺氏菌属,而其血清学试验为阴性的话则按 生化特征符合志贺氏菌属,而其血清学试验为阴性的话则按 生化特征符合志贺氏菌属,而其血清学试验为阴性的话则按 生化特征符合志贺氏菌属,而其血清学试验为阴性的话则按 生化特征符合志贺氏菌属,而其血清学试验为阴性的话则按 生化特征符合志贺氏菌属,而其血清学试验为阴性的话则按 5.5.1 5.5.1 注 1进行 试验。
5.5.3 血清学分型(选做项目) 血清学分型(选做项目) 血清学分型(选做项目) 血清学分型(选做项目) 血清学分型(选做项目)
先用 四种志贺氏菌多价血清检查,如果呈现凝集则再相应各群分别试验。先用 四种志贺氏菌多价血清检查,如果呈现凝集则再相应各群分别试验。先用 四种志贺氏菌多价血清检查,如果呈现凝集则再相应各群分别试验。先用 四种志贺氏菌多价血清检查,如果呈现凝集则再相应各群分别试验。先用 四种志贺氏菌多价血清检查,如果呈现凝集则再相应各群分别试验。先用 四种志贺氏菌多价血清检查,如果呈现凝集则再相应各群分别试验。先用 四种志贺氏菌多价血清检查,如果呈现凝集则再相应各群分别试验。先用 四种志贺氏菌多价血清检查,如果呈现凝集则再相应各群分别试验。先用 四种志贺氏菌多价血清检查,如果呈现凝集则再相应各群分别试验。先用 四种志贺氏菌多价血清检查,如果呈现凝集则再相应各群分别试验。先用 四种志贺氏菌多价血清检查,如果呈现凝集则再相应各群分别试验。先用 四种志贺氏菌多价血清检查,如果呈现凝集则再相应各群分别试验。先用 四种志贺氏菌多价血清检查,如果呈现凝集则再相应各群分别试验。先用 四种志贺氏菌多价血清检查,如果呈现凝集则再相应各群分别试验。先用 四种志贺氏菌多价血清检查,如果呈现凝集则再相应各群分别试验。先用 四种志贺氏菌多价血清检查,如果呈现凝集则再相应各群分别试验。先用 四种志贺氏菌多价血清检查,如果呈现凝集则再相应各群分别试验。先用 四种志贺氏菌多价血清检查,如果呈现凝集则再相应各群分别试验。先用 四种志贺氏菌多价血清检查,如果呈现凝集则再相应各群分别试验。先用 四种志贺氏菌多价血清检查,如果呈现凝集则再相应各群分别试验。B群福氏 群福氏 志贺氏菌多价血清进行实验,如呈现凝集再用其群和型因子分别检查 志贺氏菌多价血清进行实验,如呈现凝集再用其群和型因子分别检查 志贺氏菌多价血清进行实验,如呈现凝集再用其群和型因子分别检查 志贺氏菌多价血清进行实验,如呈现凝集再用其群和型因子分别检查 志贺氏菌多价血清进行实验,如呈现凝集再用其群和型因子分别检查 志贺氏菌多价血清进行实验,如呈现凝集再用其群和型因子分别检查 志贺氏菌多价血清进行实验,如呈现凝集再用其群和型因子分别检查 志贺氏菌多价血清进行实验,如呈现凝集再用其群和型因子分别检查 志贺氏菌多价血清进行实验,如呈现凝集再用其群和型因子分别检查 志贺氏菌多价血清进行实验,如呈现凝集再用其群和型因子分别检查 志贺氏菌多价血清进行实验,如呈现凝集再用其群和型因子分别检查 志贺氏菌多价血清进行实验,如呈现凝集再用其群和型因子分别检查 志贺氏菌多价血清进行实验,如呈现凝集再用其群和型因子分别检查 志贺氏菌多价血清进行实验,如呈现凝集再用其群和型因子分别检查 志贺氏菌多价血清进行实验,如呈现凝集再用其群和型因子分别检查 。如果 B群多价血清不凝集, 群多价血清不凝集, 群多价血清不凝集, 群多价血清不凝集, 群多价血清不凝集, 则用 D群宋内氏志贺菌血清进行实验,如呈现凝集则用其 群宋内氏志贺菌血清进行实验,如呈现凝集则用其 群宋内氏志贺菌血清进行实验,如呈现凝集则用其 群宋内氏志贺菌血清进行实验,如呈现凝集则用其 群宋内氏志贺菌血清进行实验,如呈现凝集则用其 群宋内氏志贺菌血清进行实验,如呈现凝集则用其 群宋内氏志贺菌血清进行实验,如呈现凝集则用其 群宋内氏志贺菌血清进行实验,如呈现凝集则用其 群宋内氏志贺菌血清进行实验,如呈现凝集则用其 群宋内氏志贺菌血清进行实验,如呈现凝集则用其 群宋内氏志贺菌血清进行实验,如呈现凝集则用其 群宋内氏志贺菌血清进行实验,如呈现凝集则用其 Ⅰ相和Ⅱ相血清检查;如果 血清检查;如果 血清检查;如果 血清检查;如果 血清检查;如果 B、D群多价血 群多价血 群多价血 清都不凝集,则用 清都不凝集,则用 清都不凝集,则用 清都不凝集,则用 A群痢疾志贺氏菌多价血清及 群痢疾志贺氏菌多价血清及 群痢疾志贺氏菌多价血清及 群痢疾志贺氏菌多价血清及 群痢疾志贺氏菌多价血清及 群痢疾志贺氏菌多价血清及 1~12 各型因子血清检查,如果上述三种多价都不凝 各型因子血清检查,如果上述三种多价都不凝 各型因子血清检查,如果上述三种多价都不凝 各型因子血清检查,如果上述三种多价都不凝 各型因子血清检查,如果上述三种多价都不凝 各型因子血清检查,如果上述三种多价都不凝 各型因子血清检查,如果上述三种多价都不凝 各型因子血清检查,如果上述三种多价都不凝 各型因子血清检查,如果上述三种多价都不凝 各型因子血清检查,如果上述三种多价都不凝 各型因子血清检查,如果上述三种多价都不凝 集,可用 集,可用 集,可用 C群鲍氏志贺菌多价检查,并进一步用 群鲍氏志贺菌多价检查,并进一步用 群鲍氏志贺菌多价检查,并进一步用 群鲍氏志贺菌多价检查,并进一步用 群鲍氏志贺菌多价检查,并进一步用 群鲍氏志贺菌多价检查,并进一步用 群鲍氏志贺菌多价检查,并进一步用 群鲍氏志贺菌多价检查,并进一步用 群鲍氏志贺菌多价检查,并进一步用 群鲍氏志贺菌多价检查,并进一步用 1~18 各型因子血清检查。福氏志贺菌和亚的 各型因子血清检查。福氏志贺菌和亚的 各型因子血清检查。福氏志贺菌和亚的 各型因子血清检查。福氏志贺菌和亚的 各型因子血清检查。福氏志贺菌和亚的 各型因子血清检查。福氏志贺菌和亚的 各型因子血清检查。福氏志贺菌和亚的 各型因子血清检查。福氏志贺菌和亚的 各型因子血清检查。福氏志贺菌和亚的 各型因子血清检查。福氏志贺菌和亚的 型抗原 和群抗原鉴别见表 和群抗原鉴别见表 和群抗原鉴别见表 和群抗原鉴别见表 和群抗原鉴别见表 4。关于更多标准请放主页//www.arouu.com
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